EFECTO DEL MÉTODO DE CAPACITACIÓN ESPERMÁTICA BOVINA SOBRE LA CONCENTRACIÓN Y TASA DE FERTILIZACIÓN in vitro
Resumen
Los espermatozoides mamíferos no son capaces de fertilizar el ovocito inmediatamente; primero deben sufrir un periodo de preparación llamado capacitación espermática, que se define como el conjunto de modificaciones que ocurren después de la maduración en el epidídimo, y que le confieren la capacidad de fertilizar al ovocito. Un primer requisito en el proceso de preparación de los espermatozoides para la fertilización in vitro (FIV) bovina incluye la separación de los mismos del diluyente y/o del crioprotector. Con el objetivo de examinar el efecto que tiene el método de capacitación sobre la concentración y la tasa de fertilización se realizó este trabajo en el Laboratorio de Biotecnología del IDIAP. Para ello se utilizaron ovocitos provenientes de ovarios post mortem que fueron transportados al laboratorio donde se puncionaron los folículos antrales (entre 2 mm y 5 mm). Posteriormente, se seleccionaron ovocitos con más de cinco capas de células del cúmulo y se colocaron a madurar por 20 horas. Transcurrido este tiempo se procedió a la FIV. Para la separación de la fracción espermática motil se utilizaron los métodos Gradiente de Percoll® y Swim up. La concentración espermática se midió utilizando un SpermaCue® y la tasa de fertilización se evalúo a las 18 horas post fertilización utilizando microscopio con aumento de 100x. Los resultados indicaron que la mayor concentración espermática y tasa de fertilización se observaron con Swim up (4,8 x 106 y 83,7 ± 7,8 %, respectivamente), mientras que con el Gradiente de Percoll se lograron valores de 3,5 x106 y 60,22 ± 6,3% para concentración espermática y tasa de fertilización. La producción total de embriones con ambos métodos fue de 95 embriones transferibles, con una tasa de desarrollo de 21,7%. En este estudio se observó que la motilidad espermática no influyo en la tasa de fertilización y se concluye que ambos métodos de capacitación espermática son aptos para la producción de embriones in vitro.
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Citas
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